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Analyse der Daten aus der Probenbestimmung
Analyse der Laufkontrollen
Weitere Informationen hierzu finden Sie im Flussdiagramm „Analyse der Lauf-
kontrollen" in Abbildung 37 auf Seite 93.
Negativkontrolle: Um eine Kontamination des Reaktionsgemisches auszu-
schließen, darf der C
nicht unter 40 liegen. Um sicherzustellen, dass die Platte korrekt konfiguriert
wurde, muss die Nicht-Template-Kontrolle im gelben Kanal eine Amplifikation
von 31,91 bis 35,16 aufweisen. Die beiden angegebenen Grenzwerte des
Bereichs gehören noch zu den zulässigen Werten.
Positivkontrolle: Die KRAS-Positivkontrolle (PC) muss in jedem der 8 Assays
im grünen Kanal einen C
angegebenen Grenzwerte des Bereichs gehören noch zu den zulässigen
Werten. Ein Wert außerhalb dieses Bereichs zeigt einen Fehler bei der
Assaykonfiguration an; der Lauf wird daher als fehlgeschlagen gewertet.
Hinweis: Die Probendaten dürfen nicht verwendet werden, wenn eine dieser
beiden Laufkontrollen fehlgeschlagen ist.
Wenn beide Laufkontrollen gültig sind, muss der C
Kanal im Bereich von 21,92 bis 32,00 liegen. Wenn die Probe außerhalb
dieses Bereichs liegt, gehen Sie wie folgt vor.
Probenanalyse – Kontrollassay
C
-Wert des Proben-Kontroll-Assays < 21,92: Proben mit einem Kontroll-C
T
von < 21,92 müssen verdünnt werden, da diese das untere Ende des
validierten Assaybereichs darstellen. Damit die verschiedenen Mutationen
schon in geringen Konzentrationen nachgewiesen werden können, müssen
übermäßig hoch konzentrierte Proben so verdünnt werden, dass sie im
oben angegebenen Bereich liegen. Als Faustregel hierbei gilt, dass eine
Verdünnung um die Hälfte den C
am Wert 21,92 liegt, wird eine Verdünnung empfohlen, um sicherzustellen,
dass beim Probenlauf (dem Nachweis der KRAS-Mutation) ein Ergebnis
erhalten wird. Die Proben sind mit dem im Kit enthaltenen Wasser zu
verdünnen (nukleasefreies Wasser zur Verdünnung, Dil.).
C
-Wert des Proben-Kontroll-Assays > 32: Es wird eine erneute Extraktion
T
der Probe empfohlen, da eine unzureichende Menge DNA-Starttemplate
vorhanden ist, um alle Mutationen an den für den Assay angegebenen
Cut-off-Werten nachzuweisen.
therascreen KRAS RGQ PCR Kit Handbuch 01/2019
-Wert der Nicht-Template-Kontrolle im grünen Kanal
T
-Wert von 23,5 bis 29,5 ergeben. Die beiden
T
-Wert um 1 erhöht. Wenn die Probe nahe
T
-Wert jeder Probe im grünen
T
T
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