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Leica Microsystems Heidelberg GmbH
LCS Softwarefunktionen:
Beschreibung der Einzelfunktionen
Korrektur des Übersprechens
Nachdem die Fluoreszenzfarbstoffe mittels der Clusteranalyse als getrennte Gruppen von Punkten im
Merkmalsraum isoliert wurden, gilt es die Überlagerung der Fluoreszenzsignale zu korrigieren. Die
Überlagerung zeigt sich im Merkmalsraum am Winkel der Punktewolken zu den Achsen des
Merkmalsraums.
(13)
Ideale Trennung von
(14)
Reale Ausprägumg der
(15)
Korrektur des
Fluoreszenzsignalen
Fluoreszenzsignale
Übersprechens
Denn mathematisch gesehen stehen die Punktwolken von zwei vollkommen unabhängigen, das heißt
unkorrelierten Variablen im Merkmalsraum im rechten Winkel von 90° zueinander
(13)
.
Bilddatensätze mit überlagerten Fluoreszenzsignalen zeigen jedoch Punktwolken, die aufgrund der
korrelierenden Bilddaten in Richtung der Raumdiagonalen kippen. Je spitzer der Winkel zwischen den
Punktwolken ist, desto stärker korrelieren die Fluoreszenzsignale
(14)
. Um die überlagerten
Fluoreszenzsignale zu trennen müssen demnach die Punktwolken mathematisch wieder in einen
rechten Winkel zurückgerechnet werden.
Zu diesem Zweck gilt es, für jeden Cluster einen Referenzpunkt zu ermitteln, dessen Lage im Raum
den Referenzwinkel ergibt.
(16)
Adaptive Dye Separation (Strong)
(17)
Adaptive Dye Separation (Weak)
Der errechnete Winkel der jeweiligen Geraden wird jedem Punkt der ursprünglichen Punktwolken
wieder hinzugerechnet oder abgezogen. Das wird mit einer Matrixoperatation bewerkstelligt. Dies
entspricht einer Projektion auf die Ebenen des Merkmalsraums. Das Resultat ist, dass die geneigten
Geraden/ Punktwolken wieder «aufgerichtet» werden oder anders gesagt auseinandergezogen
werden. Dies können Sie mit dem Zytofluorogramm visualisieren.
Navigation: Dye Finder\ Adaptive Dye Separation (Strong)
Navigation: Dye Finder\ Adaptive Dye Separation (Weak)
Benutzerhandbuch Leica TCS SP2 deutsch
Art.Nr.: 15-9330-052 / Vers.: 14012003
Seite 233 von 323
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