Thermo Scientific NanoDrop One Bedienungsanleitung Seite 43

Die berechneten Nukleinsäure-Konzentrationen basieren
auf dem Extinktionswert bei 260 nm, dem verwendeten
Faktor und der Weglänge der Probe. Eine
Einzelpunkt-Basislinienkorrektur (oder
Analysenkorrektur) kann ebenfalls angewendet werden.
Die Konzentration wird in Masseeinheiten ausgewiesen.
Zum Umwandeln der Konzentration von Masse- in
Molareinheiten basierend auf einer Probensequenz
stehen Rechner im Internet zur Verfügung.
Zum Berechnen der Reinheitsverhältnisse für die
gemessenen Nukleinsäureproben werden
Extinktionswerte bei 260 nm, 280 nm und manchmal
230 nm verwendet. Reinheitsverhältnisse reagieren
empfindlich auf das Vorhandensein von
Verunreinigungen in der Probe, beispielsweise
Lösungsmittelreste und Reagenzien, die typischerweise
während der Probenaufreinigung eingesetzt werden.
Thermo Scientific
Gemessene Werte
E260-Extinktion
Hinweis: Der Extinktionswert bei 750 nm wird von allen Wellenlängen im
Probenspektrum subtrahiert. Als Ergebnis beträgt die Extinktion bei
750 nm in den dargestellten Spektren Null. Auch für
Extinktionsmessungen von Mikrovolumina und Messungen mit nicht
standardisierten Küvetten (andere Küvetten als 10 mm-Küvetten) werden
die Spektren auf das Äquivalent einer 10 mm-Weglänge normalisiert.
• Die Nukleinsäure-Extinktionswerte für alle
werden bei 260 nm unter Verwendung des 750-korrigierten und
normalisierten Spektrums gemessen.
• Wenn die Option Analysenkorrektur
Extinktionswert bei der Korrekturwellenlänge von der Extinktion bei
260 nm subtrahiert.
• Wenn ein oder mehrere Farbstoffe ausgewählt wurden, werden die
Farbstoffkorrekturwerte
260 nm subtrahiert.
• Die endgültige korrigierte Extinktion bei 260 nm wird ausgewiesen
und zur Berechnung der Probenkonzentration verwendet.
E280-Extinktion
• Der 750-korrigierte und normalisierte Extinktionswert bei 280 nm
(minus der E280-Farbstoffkorrektur) wird verwendet, um ein
E260/E280-Verhältnis zu berechnen.
Messen von Mikroarrays
Mikroarray-Probentypen
ausgewählt ist, wird der
bei 260 nm ebenfalls von der Extinktion
NanoDrop One Bedienungsanleitung 37