Inhaltsverzeichnis
Werbung
In Abbildung 5-37 sehen Sie ein Beispiel für eine PCR-Grafikanzeige.
Schmelz-Grafiken
Sie können in der Grafikanzeige auch die Kurven für Schmelzproben betrachten, um den Punkt zu
bestimmen, an dem die doppelstrangige DNA dissoziiert. Damit die Daten gesammelt werden
können, muss ein Schmelz-Test oder Schmelz-Schritt in einem Test definiert werden. Nach
Abschluss des PCR wird automatisch eine Schmelzanalyse durchgeführt, bei der das
doppelstrangige Amplikon auf die im Test festgelegte Schmelzrate erhitzt wird. Während die
Temperatur nach und nach ansteigt, fängt die Systemoptik Licht, das von den Sonden-Ziel-
Hybriden über diesen Bereich freigesetzt wird. Die Fluoreszenzintensität und das durchschnittliche
Gefälle des Fluoreszenzrückgangs werden ermittelt. Das erste Derivat der Fluoreszenz wird
gegen die Temperatur genommen. Das berechnete durchschnittliche Gefälle entspricht dem
Threshold. Wenn die ersten Derivatdaten über dem Threshold liegen, werden sie als
Spitzenkandidat akkumuliert. Die Spitzenkandidaten werden dann der Größe nach in absteigender
Reihenfolge sortiert.
In Abbildung 5-38 sehen Sie eine Grafikanzeige für eine Schmelzprobe.
Grafikanzeige „Lauf X" aufrufen
oder
Ansicht
Grafik
Felder und Schaltflächen der Grafikanzeige „Lauf X"
Auswahlfeld „Gruppieren nach"
Klicken Sie auf diese Schaltfläche, um die Parameter auszuwählen, nach denen Kurven
gruppiert und angezeigt werden. Folgende Optionen stehen zur Auswahl (Beispiele sehen Sie
in Abbildung 5-36):
•
Test; Kanal: zeigt alle Proben in derselben Grafik an (eine für jede Wellenlänge). Die
Proben sind in unterschiedlichen Farben dargestellt und zuerst nach Test und dann
nach Kanal angeordnet.
•
Position: zeigt für jede Probe eine kleine Grafik an, die nach Position angeordnet ist.
•
Positive Tests: ähnelt der Option „Position", es werden jedoch nur positive Proben
angezeigt. Mit dieser Option können Sie individuelle positive Proben auswählen und
im LIS bestätigen.
•
Lauf-ID; Kanal: (nur verfügbar, wenn mehrere Läufe gleichzeitig geöffnet sind) zeigt
alle Proben in derselben Grafik an (eine für jede Wellenlänge). Die Proben sind in
unterschiedlichen Farben dargestellt und zuerst nach Lauf-ID und dann nach Kanal
sortiert.
Klicken Sie in der Menüleiste auf die Schaltfläche
„Ergebnisse".
Doppelklicken Sie in der Listenanzeige „Ergebnisse" >
„Ergebnisse" auf den Lauf. Sie können auch auf den
Lauf in der Liste und dann auf die Schaltfläche
„Anzeigen" klicken.
Klicken Sie auf die untergeordnete Registerkarte
„Grafik".
5 – Referenzmaterial
215
Werbung
Inhaltsverzeichnis
