Microscopia In Campo Scuro Ad Alto Ingrandimento - Optika Italy B-380 Serie Handbuch

11.3

Microscopia in campo scuro ad alto ingrandimento

Per lavori più precisi e sfondi più scuri, è possibile scegliere un condensatore progettato appositamente per il
campo oscuro, ovvero per trasmettere solo raggi obliqui.
Esistono diverse varietà: condensatori a campo scuro "a secco" con aria tra la parte superiore del condensatore
e la parte inferiore del vetrino e condensatori a campo oscuro a immersione che richiedono l'uso di una goccia
di olio per immersione (alcuni invece sono progettati per utilizzare l'acqua) che stabilisce il contatto tra la parte
superiore del condensatore e la parte inferiore del vetrino del campione.
Il condensatore ad immersione per campo scuro ha superfici interne a specchio e passa raggi di grande
obliquità e privi di aberrazione cromatica, producendo i migliori risultati e lo sfondo più nero.
Forse il condensatore di campo oscuro più usato è il paraboloide, costituito da un pezzo di vetro solido a cui è
stata data una forma molto precisa di un paraboloide. Come discusso sopra, il condensatore per campo scuro a
secco è utile per obiettivi con aperture numeriche inferiori a 0.75, mentre i condensatori ad immersione cardioide
e paraboloide (Fig. 23) possono essere utilizzati con obiettivi di apertura numerica molto elevata (fino a 1.4).
Gli obiettivi con un'apertura numerica superiore a 1.2 richiedono una riduzione della loro apertura di lavoro
poiché la loro apertura numerica massima può superare l'apertura numerica del condensatore, consentendo
così alla luce diretta di entrare nell'obiettivo.
Per questo motivo, molti obiettivi con aperture numeriche elevate progettati per l'uso con campo scuro e
illuminazione da campo chiaro sono realizzati con un diaframma a iride regolabile incorporato che funge da
arresto del diaframma.
Questa riduzione dell'apertura numerica limita anche il potere risolutivo dell'obiettivo e l'intensità della luce
nell'immagine. Gli obiettivi specializzati progettati esclusivamente per i lavori in campo scuro sono prodotti
con un'apertura numerica massima vicino al limite inferiore dell'apertura numerica del condensatore di campo
oscuro.
Non hanno diaframmi interni dell'iride, tuttavia i diametri di montaggio dell'obiettivo sono regolati in modo che
almeno una lente interna abbia il diametro ottimale da eseguire come arresto dell'apertura.
Il condensatore cardioide è molto sensibile all'allineamento e deve essere posizionato con cautela per sfruttare
il cono d'illuminazione molto nitido, rendendolo più difficile utilizzare il condensatore di campo oscuro.
Inoltre, il condensatore produce una quantità significativa di abbagliamento, anche dalle particelle di polvere più
minute, e la lunghezza focale corta può causare scarsa illuminazione su oggetti che superano pochi micron in
termini di dimensioni o spessore.
Quando si scelgono vetrini da microscopio per microscopia di campo scuro ad alto ingrandimento quantitativo,
accertarsi di selezionare vetrini fatti con una miscela di vetro esente da impurità fluorescenti.
È necessario prestare particolare attenzione ai dettagli sulla lubrificazione di un condensatore ad apertura
numerica elevata sul fondo del vetrino del campione. È molto difficile evitare l'introduzione di minuscole bolle
d'aria nell'area tra la lente superiore del condensatore e il fondo del vetrino del microscopio e questa tecnica
dovrebbe essere praticata alla perfezione.
Le bolle d'aria causeranno bagliori e distorsioni dell'immagine, con conseguente perdita di contrasto e
degradazione generale dell'immagine.
Si verificano inoltre problemi quando si utilizzano vetrini da microscopio troppo spessi o troppo sottili.
Molti condensatori a campo scuro contengono la gamma di spessore della guida utilizzabile incisa direttamente
sul supporto del condensatore.
Se il vetrino è troppo spesso, è spesso difficile mettere a fuoco il condensatore senza ricorrere a un olio per
immersione a viscosità più elevata. D'altra parte, i vetrini troppo sottili hanno la tendenza a rompere il legame
dell'olio tra il condensatore e il vetrino. È una buona idea acquistare vetrini da microscopio dello spessore
corretto per evitare uno dei problemi sopra menzionati.
I condensatori ad apertura numerica elevata, se destinati all'uso a secco o con olio, devono essere accuratamente
centrati nel percorso ottico del microscopio per ottenere prestazioni ottimali.
Per ottenere ciò, molti condensatori a campo scuro sono costruiti con un piccolo cerchio inciso sulla superficie
superiore per facilitare il centraggio del condensatore. La centratura viene eseguita con un obiettivo a basso
ingrandimento (10x-20x) mediante l'osservazione del cerchio inciso e utilizzando le viti di centraggio del
condensatore per garantire che il cerchio (e il condensatore) siano centrati correttamente nel percorso ottico.
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