Hochvergrößernde Dunkelfeldmikroskopie - Optika Italy B-380 Serie Handbuch

11.3 Hochvergrößernde Dunkelfeldmikroskopie
Für präziseres Arbeiten und dunklere Hintergründe können Sie einen Kondensator wählen, der speziell für das
Dunkelfeld entwickelt wurde, d.h. nur schräge Strahlen sendet.
Es gibt mehrere Varianten: "trockene" Dunkelfeldkondensatoren mit Luft zwischen der Oberseite des
Kondensators und dem Boden des Schlittens und Tauch-Dunkelfeldkondensatoren, die die Verwendung eines
Tropfens Öl durch Eintauchen erfordern (einige sind so konzipiert, dass sie stattdessen Wasser verwenden),
der Kontakt zwischen der Oberseite des Kondensators und dem Boden des Probenschlittens herstellt.
Der Dunkelfeld-Tauchkondensator hat spiegelnde Innenflächen und überträgt Strahlen mit großer Schräge und
ohne chromatische Aberration, was zu den besten Ergebnissen und dem schwarzesten Hintergrund führt.
Der vielleicht am weitesten verbreitete Dunkelfeldkondensator ist das Paraboloid, das aus einem Stück
Festglas besteht, das eine sehr präzise Form eines Paraboloids erhalten hat. Wie bereits erwähnt, ist der
Trocken-Dunkelfeldkondensator für Objektive mit numerischen Aperturen unter 0,75 nützlich, während die
Nieren- und Paraboloid-Tauchkondensatoren (Fig. 23) für Objektive mit sehr hoher numerischer Apertur (bis zu
1.4) verwendet werden können.
Objektive mit einer numerischen Apertur größer als 1.2 erfordern eine Reduzierung ihrer Arbeitsblende, da ihre
maximale numerische Apertur die numerische Apertur des Kondensators überschreiten kann, so dass direktes
Licht in das Objektiv eindringen kann.
Aus diesem Grund werden viele Objektive mit großen numerischen Aperturen, die für die Verwendung mit
Dunkelfeld- und Hellfeldbeleuchtung ausgelegt sind, mit einer integrierten, verstellbaren Irisblende hergestellt,
die als Anschlag der Membran dient.
Diese Verringerung der numerischen Apertur begrenzt auch das Auflösungsvermögen des Objektivs und die
Intensität des Lichts im Bild. Spezialobjektive, die ausschließlich für Dunkelfeldarbeiten entwickelt wurden,
werden mit einer maximalen numerischen Apertur nahe der unteren Grenze der numerischen Apertur des
Dunkelfeld-Kondensators hergestellt.
Sie haben keine inneren Irisblenden, jedoch werden die Einbaudurchmesser der Linse so eingestellt, dass
mindestens eine innere Linse den optimalen Durchmesser hat, um als Blendenstufe zu dienen.
Der Nierenkondensator ist sehr empfindlich gegen Ausrichten und muss mit Vorsicht positioniert werden, um
den sehr scharfen Beleuchtungskegel zu nutzen, was ihn zum schwierigsten Dunkelfeld-Kondensator macht.
Darüber hinaus erzeugt der Kondensator selbst bei kleinsten Staubpartikeln eine erhebliche Blendung, und die
kurze Brennweite kann zu schlechter Beleuchtung von Objekten führen, die einige Mikrometer groß oder dick
sind.
Bei der Auswahl von Dunkelfeldmikroskop-Objektträgern mit hoher Vergrößerung ist darauf zu achten, dass die
Objektträger aus einer Glasmischung ohne fluoreszierende Verunreinigungen ausgewählt werden.
Besondere Aufmerksamkeit sollte den Details der Schmierung eines Kondensators mit großer Öffnung am
Boden des Probenschlittens gewidmet werden. Es ist sehr schwierig, das Eindringen winziger Luftblasen im
Bereich zwischen der oberen Linse des Kondensators und dem Boden des Objektträgers zu vermeiden, und
diese Technik sollte perfekt geübt werden.
Luftblasen verursachen Blendung und Bildverzerrung, was zu Kontrastverlust und allgemeiner
Bildverschlechterung führt.
Auch bei der Verwendung von zu dicken oder zu dünnen Objektträgern treten Probleme auf.
Viele Dunkelfeldkondensatoren enthalten den Dickenbereich der nutzbaren Führung, die direkt auf dem
Kondensatorhalter graviert ist.
Wenn der Schlitten zu dick ist, ist es oft schwierig, sich auf den Kondensator zu konzentrieren, ohne ein
höherviskoses Immersionsöl zu verwenden. Andererseits neigen zu dünne Schlitten dazu, die Ölbindung
zwischen Kondensator und Schlitten zu lösen. Es ist eine gute Idee, Objektträger in der richtigen Dicke zu
kaufen, um eines der oben genannten Probleme zu vermeiden.
Kondensatoren mit hoher Apertur, unabhängig davon, ob sie für den trockenen oder geölten Einsatz bestimmt
sind, sollten für eine optimale Leistung sorgfältig im optischen Pfad des Mikroskops zentriert werden.
Um dies zu erreichen, sind viele Dunkelfeldkondensatoren mit einem kleinen Kreis auf der Oberseite graviert,
um die Zentrierung der Kondensatoren zu erleichtern. Die Zentrierung erfolgt mit einer Linse mit geringer
Vergrößerung (10x-20x), indem der gravierte Kreis beobachtet und die Kondensatorzentrierschrauben
verwendet werden, um sicherzustellen, dass der Kreis (und der Kondensator) korrekt im optischen Pfad
zentriert sind.
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