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4. Geben Sie 5 µl des RT-Produkts (cDNA, äquivalent zu 100 ng RNA),
das bei der reversen Transkription erhalten wurde (siehe „Protokoll:
Standardisierte reverse Transkription nach EAC-Empfehlung" auf
Seite 16) in das entsprechende Röhrchen (Gesamtvolumen 25 µl).
5. Mischen Sie jeweils durch vorsichtiges Auf- und Abpipettieren.
6. Setzen Sie die Proben gemäß den Angaben des Herstellers in den
Thermocycler ein.
7. Programmieren Sie den SmartCycler Thermocycler mit dem
zyklischen Temperaturprogramm, wie in Tabelle 16 angegeben.
Tabelle 16. Temperaturprofil
Halten ("Hold")
Halten 2 ("Hold 2")
Zykleneinstellungen
8. Wir empfehlen, einen Schwellenwert von 30 einzustellen. Starten Sie
das in Tabelle 16 angegebene zyklische Temperaturprogramm.
34
Temperatur: 50 °C
Zeit: 2 Minuten
Temperatur: 95 °C
Zeit: 10 Minuten
50 Zyklen
95 °C für 15 Sekunden
60 °C für 1 Minute mit Erfassung: Einzel ("Single")
ipsogen BCR-ABL1 Mbcr Kit Handbuch 03/2015
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