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Hochauflösende Schmelzkurvenanalyse
einheitlich wie möglich ist. Ä hnliches gilt für die Reaktions -
gefäße: Verwenden Sie nur identische Röhrchen vom selben
Hersteller, um Schwankungen aufgrund von Unterschieden
in der Wanddicke oder der Autofluoreszenzeigenschaften der
Kunststoffgefäße zu vermeiden.
Ausreichende Datenerfa ssung in Vorschmelz - und
Nachschmelzphase
HRM-Datenpunkte sollten über einen Bereich von ca. 10 °C
um den beoba chteten
Abbildung a uf Seite 11-1). Da durch sind genügend Ba seline-
Da tenpunkte für eine effektive Norma lisierung der Kurve vor-
ha nden, wa s zu reproduzierba reren Ergebnissen bei Wieder-
holproben und einfa cher zu interpretierenden Da ten führt.
1 1 .6
Pro b e n vo rb e re itu n g
Stellen Sie sicher, da ss es bei Reinigung und La gerung der
Nukleinsä uren nicht zum Abba u der Proben kommt. Vermei-
den Sie a uch zu große Mengen a n Inhibitoren, beispielsweise
durch Etha nol-Verschleppung. Um bessere Ergebnisse bei
der HRM-Ana lyse zu erha lten, empfehlen wir, eine einheit-
liche Menge a n Templa te-DNA in den Proben einzusetzen.
Kontrollieren Sie spektrofotometrisch die DNA-Konzentra tion
und die Reinheit der DNA in den Proben. Die Verwendung
von Q IAGEN Kits für die Probenvorbereitung wird
empfohlen.
Hin we is: Bei einer Wellenlä nge von 260 nm entspricht eine
Absorptionseinheit einer DNA-Konzentra tion von 50 µg/ ml.
Da s Verhä ltnis der Absorption bei 260 nm zu 280 nm
beträ gt bei reiner DNA 1,8.
1 1 .7
Ko n fig u ra tio n d e r So ftwa re
1. Legen Sie eine neue La ufda tei a n, indem Sie im "File"-
11-10
T
Menü die O ption "New..." und da nn im Adva nced
Wiza rd "HRM" wä hlen.
Rotor-Gene Q MDx Handbuch 09/ 2018
-Wert herum erfa sst werden (siehe
m
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